TY  - THES
T1  - Entwicklung und Validierung schneller und selektiver Verfahren zum Nachweis von Salmonella enterica, Cronobacter spp. und Bacillus cereus in Milcherzeugnissen
A1  - Zimmermann,Jennifer
Y1  - 2014/09/09
N2  - Kontaminationen von Lebensmitteln mit Bacillus cereus, Cronobacter spp. und Salmonella enterica sind weltweit für eine große Zahl an Erkrankungen verantwortlich. Daher werden bei Lebensmitteln hohe Ansprüche auf Hygiene und Qualität gelegt. Häufig betroffen sind Milcherzeugnisse, da diese wie z.B. Milch-, Molke- oder Sahnepulver oft als Zutat für andere Lebensmittel verwendet werden. Diese Produkte sollten jedoch generell frei von Krankheitserregern sein, um dadurch die Produktsicherheit erhöhen zu können. Es wird daher eine spezifische, zuverlässige und schnelle Identifizierung der drei pathogenen Mikroorganismen verlangt. In der Regel dauern die bisherigen verwendeten kulturellen Standardverfahren (§ 64 LFGB, ISO/TS 22964) zwischen drei und sechs Tagen. Eine Zeitersparnis zeigen dagegen molekularbiologische Verfahren, wie die Polymerase Kettenreaktion (PCR), besonders die Real-Time PCR liefert einen schnellen und direkten Nachweis der Erreger.
Das Ziel der vorliegenden Arbeit lag daher in der Entwicklung und Validierung eines molekularbiologischen Verfahrens zum Nachweis von B. cereus, Cronobacter spp. und S. enterica. Eine Diagnose, ob die Lebensmittelprobe den Erreger enthält oder nicht soll innerhalb von 24 Stunden erfolgen. Die Identifizierung der drei Zielorganismen mittels der entwickelten TaqMan Real-Time PCR erfolgte anhand spezifischer genetischer Charakteristika und unter Verwendung einer internen Amplifikationskontrolle, um falsch positive Ergebnisse ausschließen zu können. Für B. cereus wurde das groEL Gen, das für ein Hitzeschockprotein kodiert ausgewählt. Für den Nachweis von Cronobacter spp. diente das ompA Gen und für S. enterica das invA Gen. Beide Gene sind für die Invasion der beiden Pathogene in die menschlichen Epithelzellen des Gehirns und des Darms verantwortlich. Die Adaption der Verfahren an die Lebensmittelmatrix und eine Optimierung der Anreicherungszeit erfolgte mittels künstlicher Kontamination verschiedener Trockenmilchprodukte. Dabei war es möglich 105 KbE/g C. sakazakii und S. Enteritidis Zellen mit einer Anfangskeimzahl von 100 KbE/g in rekonstituierter Säuglingsnahrung nach einer Anreicherungszeit von sechs Stunden nachzuweisen. Zur Simulierung einer natürlichen Kontamination im Labormaßstab wurde pulverförmige Säuglingsnahrung mit C. sakazakii Zellen künstlich kontaminiert, getrocknet und für 4 Wochen gelagert.
Mit der entwickelten TaqMan Real-Time PCR war der Nachweis einer Anfangskeimzahl von 0,01 KbE/g trocken gestresster C. sakazakii Zellen bei einem aw-Wert von 0,22 nach einer Anreicherung über Nacht möglich.
Die entwickelten Real-Time PCR basierenden Verfahren für den Nachweis der drei wichtigen pathogenen Mikroorganismen in Milcherzeugnissen sind schnell, spezifisch und zuverlässig sowie innerhalb von 24 Stunden durchzuführen.

KW  - Cronobacter sakazakii
KW  - Salmonella
KW  - Bacillus
KW  - Real time quantitative PCR
KW  - Milchprodukt
CY  - Hohenheim
PB  - Kommunikations-, Informations- und Medienzentrum der Universität Hohenheim
AD  - Garbenstr. 15, 70593 Stuttgart
UR  - http://opus.uni-hohenheim.de/volltexte/2014/993
ER  -