RT Dissertation/Thesis T1 Molekulare Analyse des Himbeerringflecken Nepovirus (RpRSV) und Herstellung eines Konstrukts zur Induktion von RpRSV?Resistenz in Reben A1 Ebel,Rainer WP 2003/12/19 AB Das Himbeerringflecken Nepovirus (RpRSV) ist eines der Viren, welches in den Komplex der Reisigkrankheit an Reben involviert ist. Es existieren zwei verschiedene Stämme von RpRSV: den ?grapevine? ? Stamm (RpRSV-g) und den in Deutschland bedeutenderen ?cherry? ? Stamm (RpRSV-ch). Beide Stämme haben zwei RNA Stränge (RNA1 und RNA2). Beide Stränge haben ein Genom gebundenes Protein am 5' Ende und sind am 3' Ende polyadenyliert. Die RNA Stränge haben ein großes offenes Leseraster flankiert von einer 5' und 3' nicht kodierenden Region. Die offenen Leseraster kodieren für ein großes Polyprotein, welches proteolytisch in kleinere funktionelle Proteine gespaltet wird. Die Ziele der Arbeit waren die Herstellung von RpRSV resistenten Unterlagsreben sowie die genauere Charakterisierung von RpRSV. Die Strategie der Virusresistenz war die Herstellung eine Genkonstruktes, welches ein ?Gene Silencing? der Virusgene induzieren sollte. Nicotiana benthamiana wurde hierzu als Testsystem verwendet. Da keine RpRSV Sequenzdaten existierten, wurden beide Stämme von RpRSV sequenziert. Die RpRSV Stämme wurden in Chenopodium quinoa vermehrt. Die virale RNA wurde isoliert, doppelsträngige cDNA synthetisiert, kloniert und sequenziert. Die erhaltenen Sequenzen wurden intensiv miteinander verglichen. Eine Sequenz der 3' nicht kodierenden Region der RNA2 von RpRSV-ch wurde für die Herstellung eines Genkonstruktes ausgewählt. Mit der Sequenz wurde ein ?inverted repeat?, separiert von einem pflanzlichen Intron, hergestellt. Dieses Konstrukt wurde unter der Kontrolle eines 35S Promotors in die Transformationsvektoren pPZPnptII und pPZPbar kloniert. Nicotiana benthamiana wurden mittels Agrobakterien vermittelter Transformation transformiert. Die T2 Generationen der regenerierten transgenen Pflanzen wurden hinsichtlich ihrer RpRSV ? Resistenz getestet. Weiterhin wurden ?full length? Klone der RNA1 und RNA2 von RpRSV-g hergestellt. Hierzu wurde die doppelsträngige cDNA beider RNA Stränge unter der Kontrolle eines 35S Promotors kloniert. Mit den Klonen wurden erfolgreiche Infektionsexperimente durchgeführt in Chenopodium quinoa durchgeführt. K1 Reben K1 Nepoviren K1 Genkonstrukt K1 Gene Silencing K1 infektiöser Klon PP Hohenheim PB Kommunikations-, Informations- und Medienzentrum der Universität Hohenheim UL http://opus.uni-hohenheim.de/volltexte/2003/47