TY  - THES
T1  - Untersuchungen zur physikalischen Kartierung des Genoms der Weinrebe
A1  - Böhm,Andreas
Y1  - 2000/07/27
N2  - In der vorliegenden Arbeit wurden Versuche zur physikalischen Kartierung des Genoms der Weinrebe durchgeführt. Ausgehend von Blattprotoplasten wurde eine Methode zur Präparation hochmolekularer DNA aus der Rebe entwickelt. Mit Hilfe von selten schneidenden Restriktionsenzymen wurden Megarestriktionsfragmente hergestellt, in Pulsfeldagarosegelen aufgetrennt und zur Charakterisierung auf eine Membran transferiert. Ihre durchschnittliche Größe wurde mit 200 Kb bestimmt. Die maximale Länge betrug 400 Kb. Bei einem Verhältnis zwischen genetischem und physikalischem Abstand von 300 Kb / cM deckt der Durchschnitt der Restriktionsprodukte lediglich einen Bereich von weniger als 1 cM ab und ist zu klein, um mit den heute verfügbaren molekularen Markern aus der genetischen Karte eine physikalische Kartierung vorzunehmen. Daher ist die Erstellung einer physikalischen Karte aus BAC-Klonen der Kartierung von Megarestriktionsfragmenten vorzuziehen. Für die Sorte 'Vidal blanc' wurde eine genomische BAC-Bank erstellt. Daraus wurden exemplarisch 800 Klone mit einer durchschnittlichen Insertgröße von 49 kb isoliert. Nach der Transformation des kompletten Ligationsansatzes sind ca. 30000 rekombinante BAC-Klone zu erwarten. Die genomische Bibliothek besteht somit rechnerisch aus 3 Genomäquivalenten und enthält mit einer Wahrscheinlichkeit von 95  eine beliebige 'single-copy'-Sequenz. Zum Durchsuchen der partiellen BAC-Bank nach kodierenden Sequenzen und zur Identifikation von überlappenden Klonen wurden genspezifische Sonden aus der Sorte 'Regent' hergestellt. Von besonderem Interesse waren solche Gene, die mit Resistenzeigenschaften in Verbindung gebracht werden können. Eine für Chloroplasten-DNA spezifische Sonde diente zur Identifikation von BAC-Klonen mit eingebauter Plastiden-DNA. Erste Hybridisierungsexperimente mit 800 Einzelklonen ergaben acht Klone mit einem Insert aus dem Chloroplastengenom und einen Klon, der zu dem Gen für 'Osmotin' eine hohe Ähnlichkeit aufweist.

KW  - Weinrebe
KW  - Pulsfeld-Gelelektrophorese
KW  - Genkarte
KW  - Genbibliothek
CY  - Hohenheim
PB  - Kommunikations-, Informations- und Medienzentrum der Universität Hohenheim
AD  - Garbenstr. 15, 70593 Stuttgart
UR  - http://opus.uni-hohenheim.de/volltexte/2000/4
ER  -