RT Dissertation/Thesis
T1 Die kleine GTPase RagA und der potentielle Pankreastumormarker TCTP, zwei Bindungspartner des Kerntransport-Proteins RanBP3
A1 Schleicher Lilia
WP 2007/01/09
AB RanBP3 ist eine Komponente des Crm1-vermittelten Proteinexports aus dem Zellkern. Seine Bindung verstärkt die Affinität des Crm1?RanBP3-Komplexes zu RanGTP und dem nukleären Transportgut. Nach der Translokation durch die Poren in das Zytoplasma zerfällt dieser Vierkomponenten-Komplex durch die gemeinsame Wirkung von RanBP1 und RanGAP. Ziel dieser Arbeit war es, durch Identifizierung neuer Bindungspartner das Kerntransport-Protein RanBP3 besser in etablierte Transportwege einzugliedern. Durch eine Zwei-Hybrid-Analyse wurden zwei neue Bindungspartner von RanBP3 identifiziert: die kleine GTPase RagA und das translational kontrollierte Tumorprotein (TCTP). Für die Bindung von RagA an RanBP3 sind ein kurzer carboxyterminaler Teil des RagA und der N-terminale Teil von RanBP3 ausreichend. Rekombinantes RagA wurde exprimiert. Durch in vitro Bindungs-Untersuchungen wurde die Interaktion zwischen RagA und RanBP3 bestätigt. Es wurde eine konkurrierende Bindung an den C-terminalen Teil des RanBP3 zwischen dem Exportin Crm1 und RagA gezeigt. Auch die Bindung des Guaninnukleotid-Austauschfaktors RCC1 an den RanBP3-Ran-Komplex verhindert die RagA-Bindung. Die intrazelluläre Lokalisation des RagA wurde mit Hilfe eines GFP-Fusionsproteins untersucht. GFP-RagA befindet sich vorwiegend im Kern und in Kernnähe. Ein Modell für den RagA-Import und -Export wurde vorgeschlagen. Die C-terminalen Aminosäurereste 100-172 von TCTP formen die Bindungsstelle von TCTP für RanBP3. Durch Northern-Blot-Analyse wurde gezeigt, daß TCTP in allen untersuchten Geweben in zwei mRNAs transkribiert wird. Das aus einer ovarialen cDNA-Bibliothek vervollständigte TCTP wurde kloniert und exprimiert. Mittels qPCR wurde gezeigt, daß die TCTP-mRNA zu der kleinen Gruppe mit sehr großer Kopienzahl pro Zelle gehört. Die Interaktion zwischen TCTP und RanBP3 wurde durch in vitro Bindung bestätigt. Es wurden polyklonale Antikörper gegen rekombinantes TCTP hergestellt. Die intrazelluläre Lokalisation wurde in indirekten Immunfluoreszenzstudien untersucht. In Cos7-Zellen befindet sich TCTP im Kern und der Kernumgebung. In humanen Zelllinien zeigte sich TCTP am stärksten in einem Bereich nahe der Kernmembran. Es wurde gezeigt, daß der TCTP-Spiegel in Pankreas-Tumoren erhöht ist. Auch eine Differenzierung von Pankreatitis und Pankreastumoren ist nach diesen Ergebnissen möglich. TCTP könnte zum Pankreas-Tumormarker oder zum Prognosefaktor für das duktale Adenokarzinom des exokrinen Pankreas werden.
K1 Tumormarker
K1 Bindungspartner
K1 Kerntransport-Protein
K1 RanBP3
K1 TCTP
PP Hohenheim
PB Kommunikations-, Informations- und Medienzentrum der Universität Hohenheim
UL http://opus.uni-hohenheim.de/volltexte/2007/162